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人端粒长度检测技术是一种用于测量人体细胞中端粒的长度的分子生物学方法。端粒是染色体末端的保护性DNA序列,它们在细胞分裂和衰老过程中起着重要作用。测量端粒长度对于研究衰老、细胞健康、癌症等领域具有重要意义。
我们通过qPCR检测样本和参考DNA (reference DNA) 的端粒拷贝数 (T) 和单拷贝基因 (single-copy gene, S) 的比值T/S,而该比值与端粒的平均长度成正比,从而得到不同样本端粒的相对长度信息。
技术优势:
本技术灵敏度高,特异性好,操作简单快速,检测通量灵活,适用于各种人类样本的端粒的相对长度检测。
样本类型:Total DNA;
样品需求量:Qubit检测,要求浓度Qubit ≥ 10ng/ul,总量 ≥ 300ng;
样本完整度:琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA完整性,要求电泳条带清晰可见,无明显降解,且无RNA污染;
样品需要低温保存和运输。
本方法采用Sybrgreen方法利用荧光实时定量PCR检测系统对1个端粒基因进行长度检测。每个样品每个基因进行3重复检测。加入1个对照基因的标准内参,设置3重复检测。
分析内容
1. 端粒与内参基因位点的扩增曲线、熔解曲线图;
2. 端粒与内参基因位点的Ct值原始数据;
3. 端粒相对长度的数据分析及柱状图展示。
文章题目 | 期刊名 | 影响因子 | 发表时间 |
Sperm mtDNA copy number, telomere length, and seminal spermatogenic cells in relation to ambient air pollution: Results of a cross-sectional study in Jing-Jin-Ji region of China(精子线粒体DNA拷贝数、端粒长度和精液生精细胞与环境空气污染的关系:中国京津冀地区横向研究结果) | J Hazard Mater. | 9.038 | 2020-10-23 |
Depressive Symptoms Predict Change in Telomere Length and Mitochondrial DNA Copy Number Across Adolescence(抑郁症状预示着青春期端粒长度和线粒体基因拷贝数的变化) | J Am Acad Child Adolesc Psychiatry. | 6.936 | 2020-12 |
Prenatal aluminum exposure is associated with increased newborn mitochondrial DNA copy number(产前铝暴露与新生儿线粒体基因拷贝数增加有关) | Environ Pollut. | 6.792 | 2019-9 |
1、内部参考基因的选择是否会影响检测准确性?
答:是的,选择不适当的内部参考基因或标准曲线的建立可能影响端粒长度测定的准确性。
所以需要结合文献,选择稳定的内部参考基因并进行验证。建立标准曲线时,使用适当的参考材料和浓度。
2、实验是否需要做重复?
答:是的,实验的重复性不足可能导致不一致的结果。为了确保实验的重复性,可以进行3次重复并取平均值,以提高结果的可靠性。
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