“昊创新、好技术！”
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m6A修饰RNA表达水平定量检测（MeRIP-qPCR）是将RNA免疫共沉淀与荧光定量PCR相结合的技术，通过特异性抗体富集total RNA中发生m6A甲基化修饰的RNA，借助特异性引物实现对m6A修饰的mRNA、lncRNA或circRNA进行定量的目的，可以应用于经MeRIP-seq发现的m6A修饰的基因（或已知的某个靶基因）在组间样本中m6A修饰水平的差异验证。
技术优势：
•特异性好：利用m6A甲基化特异性抗体进行富集，利用特异性引物进行定量检测；
•成本低：无需提前去除rRNA，样本需求量和检测成本较低；
•通量大：样本和检测位点数目灵活可变，多至384孔同时检测；
•精准度高：扩增和检测在同一管，不易污染；平行设置3个重复，减少系统误差。
样本类型：完整无基因组DNA污染的Total RNA
样本需求量：总量 ≥ 100 μg，浓度 ≥ 200 ng/μL
样本纯度：OD260/280 = 1.8~2.2，OD260/230 ≥ 2.0
样本完整度：Agilent 2100 Bioanalyzer 检测RIN值 ≥ 7.0，28S/18S ≥ 1.0
数据分析内容:
1) 目的基因的扩增曲线图 2) 目的基因的熔解曲线图 3) 目的基因的Ct值原始数据 4) 目的基因相对表达量分析数据及柱状图展示 注：每个检测设置三重复避免实验误差；每个样品对应一个总RNA样本(INPUT)和一个抗体富集RNA样本(IP)，分别进行目的基因的定量检测；目的基因相对定量采用2-ΔCt法计算，其中ΔCt = Ct(IP) - Ct(INPUT)。 |
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