“昊创新、好技术！”
天昊生物多年专注于深耕遗传学和基因组学等领域科研特色技术的开发，不断跟进国际先进的科研成果及技术发展，创新研发了许多特色专利技术和领域内前沿的检测服务项目，受到广大专业科研用户的认可和好评。
微生物特定菌实时荧光定量PCR（qPCR）绝对定量是一种利用荧光定量PCR技术对微生物特定基因进行定量分析的方法。该方法利用引物和探针与目标DNA特异性结合，通过PCR扩增并荧光信号实时监测，从而实现对微生物特定基因数量的精确定量。qPCR通过检测荧光信号对PCR反应过程进行实时检测的技术。反应体系中的SYBR染料可以特异性地与新合成的双链DNA产物结合，释放荧光信号指征PCR扩增产物的累积，在扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，通过相对定量（与内参基因对比）或绝对定量（通过标准曲线对未知模板进行定量）的方法确定各个样本的本底表达量。
技术参数：
本技术是测定目的基因在样本中的分子数目，通过构建标准曲线对未知模板进行分子数目的定量，即通常所说的拷贝数。
样本类型及需求量：
完整无污染的基因组DNA，样本需求量：10ul（保证2次实验用量）（指至少0.5g样本进行抽提，50-70ul体积溶解的DNA原液）
土壤/植物等原始样本：样本需求量≥2g。
分析过程分为实验室操作和数据分析两部分。
实验室操作包括样品DNA提取、荧光PCR扩增、以及扩增后荧光信号的实时监测；
数据分析包括数据处理和结果解释。
1、微生物特定菌qPCR绝对定量能否检测到多个目标细菌？
答：可以。可以使用多个引物和探针同时进行扩增和检测，从而实现多个目标微生物同时检测。
2、qPCR有哪些注意事项？
答：避免污染：qPCR实验对样品的纯度和质量要求较高，需要避免DNA污染。实验室应建立RNA酶和DNA酶分离的区域，严格控制样品的取用和实验室操作。
引物和探针的设计：引物和探针的设计应选择特异性良好的序列，以避免与其他序列的杂交和干扰。
标准曲线的制备：标准曲线的制备应该充分考虑实验过程中的变异性，以确保结果的准确性。
数据解释：需要对实验结果进行科学解释，充分考虑实验设计、样品特点等因素。
3、qPCR与常规PCR有何不同？
答：qPCR是一种实时定量PCR技术，它通过实时检测PCR扩增过程中荧光信号的强度变化，实现对PCR产物数量的定量。而常规PCR则是通过PCR扩增后再进行检测。
copyright © 2008-2023 天昊生物 reserved. ICP备案序号：沪ICP备18028200号-1
沪公网安备 31011502016782号
FastTarget®目的区域测序
