Olink现已是世界上受信赖的下一代蛋白质组学平台之一，Olink的邻位延伸分析（Proximity Extension Assay，PEA）技术独特地结合了特异性和可扩展性，实现了高通量、多重蛋白质生物标志物分析。Olink已在广泛的人类疾病领域开展有极具影响力的研究，加深了对基础生物学的理解，并提供了可操作的生物标志物，以对患者进行分层，并加速药物开发。下边我们将近期不同疾病免疫治疗方向发表的应用Olink蛋白组技术的文章分享给大家。

 01 

Nature Medicine（IF：58.7）：纳武单抗溶瘤免疫治疗肌肉浸润性膀胱癌：1b期试验

对于不适合顺铂治疗的肌肉浸润性膀胱癌患者，安全有效的新辅助治疗是一个亟待满足的需求。在这里，我们启动了一项1b期研究，使用膀胱内cretostimogene grenadenorepvec（溶瘤血清型5腺病毒编码粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）与全身纳武单抗联合治疗顺铂不适合的cT2-4aN0-1M0肌肉浸润性膀胱癌患者。主要目的是检测安全性，次要目的是通过病理完全缓解和1年无复发生存期来评估抗肿瘤疗效。21例入组和治疗的患者未出现剂量限制性毒性。联合治疗的病理完全缓解率为42.1%，1年无复发生存率为70.4%。病理反应与基线游离E2F活性和肿瘤突变负荷相关，但与PD-L1状态无关。尽管膀胱溶瘤免疫治疗后广泛诱导T细胞浸润，但三级淋巴结构的形成、扩大和成熟与完全反应特异性相关，表明协调的体液和细胞免疫反应的重要性。总之，这些结果突出了该联合方案在不适合顺铂肌肉浸润性膀胱癌患者中提高治疗效果的潜力，值得作为新辅助治疗选择的进一步研究。（本研究利用Olink Target 96 panel检测了患者尿液样本中的蛋白水平）

 02 

Nature（IF：50.5）：单细胞CAR T图谱显示8年白血病缓解的2型功能

尽管嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）有很高的应答率，但大约50%的患者在第一年复发，这是细胞免疫治疗下一阶段亟待解决的问题。在这里，为了研究超长CAR T细胞持久性的分子决定因素，我们从基础水平或CAR T特异性刺激后的695,819个CAR T细胞中获得了单细胞多组学图谱，这些细胞来自82名参加前两项CAR T ALL临床试验的儿科ALL患者和6名健康供者。我们发现CAR T输注产品中2型功能的升高与患者维持中位B细胞发育不全持续时间8.4年显著相关。配体-受体相互作用的分析表明，2型细胞调节一个功能失调的亚群来维持整个群体的稳态，在抗原特异性激活过程中添加IL-4可以减轻CAR T细胞功能失调，同时在转录组和表观基因组水平上增强适应性。治疗后血清的系列蛋白质组学分析显示，5年或8年无复发应答者的循环2型细胞因子水平较高（利用Olink Explore 384 panel检测患者血清中蛋白水平）。在白血病小鼠模型中，2型高CAR T细胞产品表现出优越的扩增和抗肿瘤活性，特别是在白血病再挑战后。通过在制造过程中加入IL-4或在输注前用IL-4启动制造的CAR T产品，可以增强其2型功能，从而恢复2型低CAR T细胞的抗肿瘤功效。我们的研究结果为持久CAR T治疗反应的介质提供了见解，并提出了通过增强CAR T细胞的2型功能来维持长期缓解的潜在治疗策略。

 03 

Signal Transduction and Targeted Therapy（IF：40.8）：新辅助溶瘤病毒orienx010和特瑞普利单抗治疗可切除肢端黑色素瘤：一项Ib期试验

新辅助PD-1抑制剂在皮肤黑色素瘤中有希望，但在肢端黑色素瘤（AM）中仍未知。这项Ib期临床研究评估了新辅助溶瘤病毒orienX010（ori）和抗PD-1特瑞普利单抗（tori）联合治疗可切除性AM的有效性和安全性。30例III/IV期患者术前12周接受ori和tori新辅助治疗，术后1年接受tori辅助治疗。主要终点是放射学和病理反应率，次要终点是1年和2年无复发生存（RFS）率、无事件生存（EFS）率和安全性。27例完成手术及tori辅助治疗，中位随访35.7个月。影像学和病理反应率分别为36.7%和77.8%，完全缓解率分别为3.3%和14.8%，1年和2年RFS率分别为85.2%和81.5%，1年和2年EFS率分别为83%和73%。所有患者均发生不良事件，主要为1-2级。PET/CT评价与病理反应或无进展生存期/总生存期之间无相关性。病理反应患者表现为肿瘤床高三级淋巴结构（TLSs）和肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）。细胞因子和趋化因子分析显示，联合治疗显著增加了反应者和无反应者的促炎细胞因子和趋化因子的分泌（利用Olink Target 96 panel检测了患者基线及治疗中血清样本的细胞因子和趋化因子）。因此，新辅助ori和tori显示出有希望的抗肿瘤活性，具有高缓解率和高2年RFS/EFS，具有可接受的耐受性。

 04 

Molecular Cancer（IF：27.7）：用溶瘤病毒治疗重塑“冷”软组织肉瘤的肿瘤微环境：肿瘤内JX-594联合阿维鲁单抗和低剂量环磷酰胺的2期试验

大多数软组织肉瘤（STS）表现出免疫抑制肿瘤微环境（TME），导致对免疫检查点抑制剂（ICIs）的耐药性和有限的治疗反应。临床前数据表明，溶瘤病毒治疗可以重塑TME，促进T细胞聚集，增强这些肿瘤的免疫原性。

我们进行了一项II期临床试验METROMAJX，以研究JX-594（一种用于选择性肿瘤细胞复制的溶瘤性痘苗病毒）与节拍性环磷酰胺及PDL1抑制剂阿维鲁单抗在晚期“冷”STS患者中的联合治疗，其特征是缺乏三级淋巴结构。该试验采用了两阶段的Simon设计。JX-594以每2周1.109 pfu的剂量瘤内给药，共4次瘤内给药。环磷酰胺50mg口服，每日两次，按用药一周，停一周的策略，阿维鲁单抗10mg /kg给药，每两周给药。主要终点是6个月无进展率。

15名患者入组，常见的毒性是1级疲劳和发烧。14例患者可评估疗效分析。在6个月时，只有一名患者保持无进展，这表明该试验没有达到Simon设计的第一阶段终点。连续组织活检和血浆样本分析显示CD8密度增加，免疫相关蛋白生物标志物上调，包括CXCL10（利用Olink Target 96免疫肿瘤学panel检测了患者血浆中的蛋白水平）。

肿瘤内给药JX-594联合环磷酰胺和阿维鲁单抗是安全的，并且能够调节冷STS的TME。然而，观察到的有限疗效值得进一步研究，以确定溶瘤病毒的治疗潜力，特别是与STS的特定组织学亚型有关。

 05 

Blood（IF：21）：儿童和青少年嵌合抗原受体T细胞治疗后的四肢轻瘫和下肢轻瘫

免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS）是一种与嵌合抗原受体T细胞（CART）治疗相关的常见但潜在的严重不良事件，其特征是在CART输注后出现急性神经系统症状。ICANS包括广泛的临床谱，以轻度至重度脑病、癫痫发作和/或脑水肿为典型。随着越来越多的患者接受CART治疗，出现了新的ICANS现象。我们报告了在输注CD19或CD22导向的CART后5例小儿急性四肢轻瘫和下肢轻瘫的临床过程，与出现脑和/或脊柱神经成像异常相关，此前未在儿童中报道不良事件。尸检研究、脑脊液（CSF）流式细胞术和脑脊液蛋白质组学/细胞因子分析的正交数据显示慢性白质破坏，但明显缺乏炎症病理改变和细胞群。相反，CART治疗后患有四肢轻瘫和下肢轻瘫的儿童的促炎细胞因子水平较低，如干扰素γ、CCL17、CCL23和CXCL10，而不是那些没有发生四肢轻瘫和下肢轻瘫的儿童。综上所述，这些发现暗示了这种新描述的儿童ICANS现象的非炎症来源。因此，CART后一些神经系统症状的病理生理学可能比单纯的T细胞活化和过度的细胞因子产生具有更复杂的病因（利用Olink Target 96 panel检测了患者脑脊液中的蛋白水平）。

 06 

Blood（IF：21）：gamma分泌酶抑制和CAR T细胞治疗后多发性骨髓瘤微环境的单细胞分析

嵌合抗原受体（CAR）T细胞和靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的双特异性抗体（BsAb）显著推进了复发和难治性多发性骨髓瘤（MM）的治疗。然而，对BCMA靶向治疗的耐药性仍然是一个重大挑战。γ-分泌酶释放BCMA是一种已知的耐药机制，临床前研究表明抑制BCMA可能会改善抗BCMA治疗。利用γ-分泌酶抑制剂（GSI）crenigacestat与抗BCMA CAR T细胞（FCARH143）的I期临床试验，我们利用单核RNA测序和转座酶可及性染色质（ATAC）测序来表征GSI对肿瘤微环境的影响。GSI显著的影响涉及对单核细胞的影响，已知单核细胞可促进肿瘤生长。除了观察到非经典单核细胞频率的减少外，我们还检测到基因表达、染色质可及性的显著变化，并推断了暴露于GSI后细胞间的相互作用。尽管许多表达改变的基因与γ-分泌酶依赖性信号相关，如Notch，但其他途径也受到影响，这表明GSI具有深远的影响。后，我们在一些先前接受过抗BCMA治疗的患者中检测到BCMA基因座的单等位基因缺失，这与无进展生存期降低显著相关（中位PFS为57天vs 861天）。GSI正在与全谱BCMA靶向药物联合进行探索，我们的研究结果揭示了GSI对肿瘤和免疫细胞群的广泛影响，为增强BCMA定向治疗的机制提供了见解（利用Olink Target 48 panel检测了患者血浆中的蛋白水平）。

 07 

Nature Communications（IF：14.7）：纳武单抗联合盐酸安洛替尼治疗晚期胃腺癌和食管鳞状细胞癌：II期OASIS试验

血管内皮生长因子抑制剂，包括酪氨酸激酶抑制剂（TKIs），具有免疫调节特性，并在与抗PD-1抗体联合使用时显示出良好的效果。OASIS II期试验（NCT04503967）旨在确定纳武单抗（抗PD-1）和盐酸安洛替尼（一种多靶点TKI）作为二线或以上治疗晚期胃腺癌（GAC）和食管鳞状细胞癌（ESCC）患者的临床活性和安全性。2020年12月至2022年9月，本研究纳入45例GAC患者和3例ESCC患者。达到预定终点，主要终点总有效率达到29.2%。二级目标疾病控制率为64.6%；中位无进展生存期为4.0个月；中位总生存期为11.1个月，毒性可控。探索性分析揭示，肠道细菌的平衡和以CD68+PD-L1+ PD-1+巨噬细胞高比例和低预处理变异等位基因频率（VAF）为特征的预先存在的免疫特征的存在，以及某些细胞因子的低表达（利用Olink Target 96 panel检测了患者治疗基线血清样本的蛋白水平）与GAC患者临床结果的改善显着相关。

 08 

Nature Communications（IF：14.7）：替雷利珠单抗联合西妥昔单抗和伊立替康治疗难治性微卫星稳定型和RAS野生型转移性结直肠癌：单臂2期研究

免疫疗法对微卫星稳定（MSS）转移性结直肠癌（mCRC）的治疗几乎没有益处。机制提示表皮生长因子受体（EGFR）抗体加伊立替康可能增强mCRC的肿瘤免疫应答。因此，我们对33例MSS和RAS野生型（WT）mCRC患者进行了一项概念验证、单臂2期研究，包括替雷利珠单抗（抗PD-1）、西妥昔单抗（抗EGFR）和伊立替康的联合治疗方案，这些患者之前接受过≥2线治疗。主要终点得到满足，客观有效率为33%。作为次要终点，疾病控制率为79%，中位无进展生存期和总生存期分别为7.3和17.4个月。33例患者中，32例（97.0%）发生治疗相关不良事件（AEs）。3例（9.1%）报告了≥3级AEs，包括皮疹（n = 1），中性粒细胞减少（n = 2）。使用下一代测序对动态循环肿瘤DNA进行事后评估和使用Olink对外周免疫蛋白质组学景观进行分析显示，基线时较低的变异等位基因频率（VAF），治疗后VAF的更大降低，以及热的外周宏观环境与治疗反应独立相关。我们的研究显示，替雷利珠单抗、西妥昔单抗和伊立替康联合治疗MSS和RAS WT mCRC的抗肿瘤活性和可耐受的安全性（利用Olink Target 96免疫肿瘤学panel检测了患者治疗前后血浆中的蛋白水平）。

 09 

Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF：11.4）：晚期实体瘤患者单次静脉注射溶瘤腺病毒TILT-123可导致全身肿瘤转导和免疫应答

背景：已批准的溶瘤病毒的局限性在于它们需要瘤内注射。TILT-123是一种嵌合溶瘤腺病毒，由于其衣壳修饰和双选择性装置，适合静脉递送。它携带肿瘤坏死α和白细胞介素-2，促进T细胞活化和淋巴细胞向肿瘤转运，从而增强抗肿瘤免疫反应。在这里，我们介绍了在三个I期剂量递增临床试验中单次静脉注射TILT-123后的结果。

方法：晚期实体瘤患者初始给予3×109 ~ 4×1012病毒颗粒（VP）的TILT-123单次静脉注射。在基线、治疗后1、16和192小时（7天）采集血液进行生物利用度和血清分析。治疗前和治疗后7天采集肿瘤活检，分析病毒存在和免疫效应。在此期间，患者没有接受任何其他癌症治疗（利用Olink Target 96免疫肿瘤学panel检测了治疗前后患者血清中的蛋白水平）。

结果：在所有三项试验（TUNIMO、TUNINTIL和PROTA）中，总共有52名患者接受了TILT-123静脉注射治疗。总体而言，TILT-123耐受性良好，未观察到剂量限制性毒性。治疗后肿瘤活检显示病毒基因的表达，TILT-123腺病毒蛋白或DNA的存在，以及免疫细胞浸润的变化。增加的病毒剂量没有导致肿瘤中病毒检测增加。治疗后活检证实存在TILT-123的患者中位总生存期更长（280天对190天，p = 0.0405）。

结论：TILT-123在单次静脉注射后显示出安全性和显著的肿瘤内免疫调节作用，值得进一步研究。

 10 

Journal for ImmunoTherapy of Cancer（IF：10.3）：埃罗妥珠单抗联合自体干细胞移植和来那度胺治疗多发性骨髓瘤的一期研究

背景：诱导治疗后自体干细胞移植（ASCT）可提高多发性骨髓瘤（MM）患者的无病生存率。虽然ASCT的目标是使疾病状态小化，但它也与免疫抑制细胞的根除有关，我们假设ASCT后早期引入免疫治疗可能为提高治疗效果提供机会。方法：开展1期临床试验，探讨自体淋巴细胞输注和抗SLAMF7单克隆抗体-埃罗妥珠单抗在新诊断的MM患者中ASCT后的应用，其先前接受诱导治疗。除了CD34+干细胞外，移植前收集外周血单个核细胞，并在干细胞输注后第3天输注，以加速免疫重建并提供对埃罗妥珠单抗机制至关重要的自体自然杀伤（NK）细胞。从第4天开始给予埃罗妥珠单抗，然后每28天给予一次，直到ASCT后1年。第4-12周期给予标准护理来那度胺维持治疗（利用Olink Target 96免疫肿瘤panel检测了患者骨髓血浆样本的蛋白水平）。

结果：所有受试者均进行了安全性评价，15例受试者中有13例完成了治疗方案。ASCT后1年，入选受试者的疾病状态如下：5例严格完全缓解，1例完全缓解，6例非常好部分缓解，1例部分缓解，2例疾病进展。治疗方案耐受性良好，大多数3级和4级AEs与ASCT相关的血液学毒性是预期的。免疫微环境的相关分析表明，在移植后的前3个月，调节性T细胞减少的趋势，随后在完全缓解的患者中NK细胞和单核细胞增加。

结论：该1期临床试验表明，在ASCT后早期引入免疫治疗具有良好的耐受性，并且在MM患者中显示出有希望的疾病控制，伴随着免疫微环境的有利改变。

 11 

Journal for ImmunoTherapy of Cancer（IF：10.3）：食管癌免疫治疗中血管生成相关血清蛋白的预后和预测价值

背景：免疫检查点抑制剂（ICIs）可以显著提高多种癌症患者的生存率。然而，食管癌的治疗反应仅限于患者亚组，缺乏临床有用的预测性生物标志物。

方法：收集91例食管癌患者在ICI治疗前后的血浆样本。Olink免疫肿瘤学panel（92种蛋白质）与邻位延伸法用于检测血浆和与治疗结果相关的潜在生物标志物的动态变化。为了更好地预测食管癌免疫治疗患者的预后和治疗反应，我们筛选了所有与生存相关的蛋白，并建立了风险评分模型。

结果：我们发现，在ICI治疗期间，92种定量蛋白中有47种的血浆水平发生了显著变化（p<0.050），这些变化的蛋白参与免疫相关反应，如细胞间粘附和T细胞活化。值得注意的是，三种血管生成相关蛋白（IL-8、TIE2和HGF）的基线水平与接受ICIs治疗的患者的生存结果显著相关（p<0.050）。根据这些预后蛋白，我们建立了血管生成相关的风险评分，这可能是ICI反应预测的优越生物标志物。此外，与ICI单药治疗相比，抗血管生成治疗联合ICI可显著提高总生存率（p=0.044）。

结论：基于三种蛋白（IL-8、TIE2、HGF）的血管生成相关风险评分可以预测食管癌患者的ICI反应和预后，值得进一步验证。我们的研究强调了结合ICIs和抗血管生成治疗的潜在应用，并支持Olink血浆蛋白测作为生物标志物探索的液体活检方法。

 12 

Clinical Cancer Research（IF：10）：18F FDG-PET CT扫描评估代谢性肿瘤体积作为晚期非小细胞肺癌免疫检查点阻断剂的预测性生物标志物及其生物学相关性

目的：本研究旨在探讨18F-氟脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描-计算机断层扫描（18F-FDG-PET/CT）评估的代谢肿瘤体积（MTV），并了解其在暴露于免疫检查点阻断剂（ICB）的非小细胞肺癌（NSCLC）患者中的生物学意义。

实验设计：在本研究中，4个国家的11家机构招募了一线治疗42天内PET扫描阳性的晚期NSCLC患者。分析总MTV (tMTV)，大标准摄取值阈值为42%。根据高tMTV（≥中位数）分析生存期。血浆蛋白质组谱（利用Olink Target 96 及Explore 384 panel检测患者血浆中蛋白水平）、全外显子组、转录组和其他分析在单中心队列中进行，以探索其生物学相关性。

结果：纳入的518例患者中，167例接受了ICBs，257例化疗加ICBs，94例化疗。中位tMTV为99 cm3。接受ICBs治疗的高tMTV患者的中位总生存期（OS）为11.4个月，而低tMTV患者的中位总生存期为29.6个月（P < 0.0012）。在接受化疗-ICB的患者中，tMTV与OS无相关性（P = 0.099）。在程序性死亡-配体1 (PD-L1)≥1%和高tMTV的患者中，与单独使用ICB相比，化疗-ICB联合治疗的生存期更长(20个月vs 11.4个月；P = 0.026)，而低tMTV组生存率无差异。高tMTV与特定的蛋白质组学特征和基因组不稳定性增加相关。

结论：我们的分析表明，高tMTV与全身性炎症、特异性细胞因子产生和染色体不稳定性的增加有关。tMTV可作为PD-L1阳性晚期NSCLC患者选择佳前期治疗策略的生物标志物之一。

 13 

Clinical Cancer Research（IF：10）：免疫疗法或DNA损伤修复抑制剂的新组合治疗铂难治性广泛期小细胞肺癌：II期BALTIC研究

目的：II期、多组、信号搜索的BALTIC研究（NCT02937818）评估了铂难治/耐药广泛期小细胞肺癌（ES-SCLC）的新治疗组合。

患者和方法：在完成一线铂基化疗期间或90天内疾病进展的ES-SCLC患者接受三种方案中的一种：德瓦鲁单抗加曲美木单抗，然后是德瓦鲁单抗单药治疗（A组），adavosertib加卡铂（B组），或ceralasertib加奥拉帕尼（C组）。主要终点是客观缓解率。在A组和C组进行了预先指定的探索性生物标志物分析。

结果：在A组（n = 41），B组（n = 10）和C组（n = 21）中，确认的客观缓解率分别为7.3%，0%和4.8%。所有组的安全性与单个药物的安全性一致。在A组中，PD-L1表达（肿瘤细胞或免疫细胞）≥1%的患者似乎比PD-L1（肿瘤细胞和免疫细胞）<1%的患者在德瓦鲁单抗加曲美木单抗治疗下更有可能实现疾病控制，较低的基线ctDNA和治疗时ctDNA水平的降低都与较长的总生存期相关。在C组接受ceralasertib+奥拉帕尼治疗的患者中，特异性免疫应答相关的循环趋化因子和细胞因子被确定为生存和药效学生物标志物的早期生物标志物（利用Olink Target 96免疫肿瘤及心血管疾病III panel检测了患者血浆样本的蛋白水平）。

结论：在BALTIC中，所有联合方案均显示出可耐受的安全性，但在难治/耐药ES-SCLC中抗肿瘤活性有限。在接受德瓦鲁单抗加曲美木单抗联合治疗的患者中，ctDNA的治疗减少与更长的总生存期相关，这表明ctDNA可能用作治疗反应的替代品，值得进一步研究。

 14 

Journal of Neurology Neurosurgery and Psychiatry（IF：8.7）：隐源性新发难治性癫痫持续状态的预后预测及免疫治疗优化

背景：隐源性新发难治性癫痫持续状态（cNORSE）目前缺乏对其临床动态、预后因素和治疗指导的全面认识。在这里，我们提出了cNORSE患者纵向临床概况，结局的预测因素和免疫治疗的佳持续时间。

方法：本回顾性次要终点分析调查了来自韩国国家转诊中心前瞻性自身免疫性脑炎队列的cNORSE患者。主要结果包括纵向功能量表、癫痫发作频率和抗癫痫药物的数量。检测包括与NORSE相关的临床参数，如无意识持续时间、免疫治疗概况、细胞因子/趋化因子分析和连续MRI扫描（利用Olink Target 48 panel检测了患者血浆及脑脊液中的蛋白水平）。

结果：共分析74例cNORSE患者（平均年龄：38.0±18.2；男性36例（48.6%））。所有患者均接受一线免疫治疗，91.9%（68/74）患者接受二线免疫治疗。共有83.8%（62/74）患者在中位持续时间30天（14-56天）内恢复了意识，50%（31/62）患者在2年时获得了良好的预后（mRS≤2）。较差的1年预后（mRS≥3）是通过3个月MRI中颞叶（mTL）和颞叶外病变的存在以及长时间的无意识（≥60天）来预测的。mTL萎缩患者在NORSE后表现出更高的癫痫发作负担。免疫治疗的佳持续时间似乎是在NORSE发病后18周至1年之间。

结论：本研究阐明了cNORSE患者的纵向临床动态、功能结局、预后因素和免疫治疗反应。这些发现可能有助于对cNORSE的更标准化的理解和临床决策。

 关于昊为泰