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RNA qPCR检测

  • RNA qPCR检测即RNA定量PCR技术，是基因表达水平定量的金标准，也是转录组测序后对表达水平验证的必不可少的环节。RNA qPCR检测主要包括三个步骤，RNA的提取与质控、逆转录为cDNA、以及实时荧光定量PCR实验，

    技术路线:

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  • 样品要求

    常规mRNA定量

    a) 需求量：Total RNA总量> 1 μg；浓度≥ 50 ng/μL

    b) 纯度：OD260/280介于1.8-2.2之间

    c) 完整度：RNA无明显降解，琼脂糖凝胶电泳28S/18S条带清晰可见

    常规lncRNA定量

    a) 需求量：Total RNA总量> 1 μg；浓度≥ 50 ng/μL

    b) 纯度：OD260/280介于1.8-2.2之间

    c) 完整度：RNA无明显降解，琼脂糖凝胶电泳28S/18S条带清晰可见

    常规miRNA定量

    a) 需求量：Total RNA总量> 500 ng；浓度≥ 100 ng/μL

    b) 纯度：OD260/280介于1.8-2.2之间

    c) 完整度：RNA无明显降解，琼脂糖凝胶电泳28S/18S条带清晰可见

    定量方法

    ABI 7300/7900荧光定量PCR仪，SYBR Green相对定量法

    数据质量

    Ct < 30；溶解曲线单一；两重复平行性好




  • 分析与结果:

    基本分析

    1) 靶基因与内参基因扩增曲线

    2) 靶基因与内参基因溶解曲线

    3) 靶基因与内参基因Ct值原始数据（SDS文件）

    4) 靶基因相对表达量分析数据及柱状图展示




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