微量mRNA扩增转录组测序利用SMART-seq2技术进行mRNA的高效、无偏好扩增和高通量测序，尤其适用于无法获得大量组织或细胞的微量样本。通过对微量样本在某一功能状态下所能转录出来的全部mRNA进行测序，从而全面快速得到基因表达谱的信息。

细胞内核糖体RNA（rRNA）在总RNA中占比约80％~95％，高丰度的rRNA在目标分子含量较少的研究中会成为巨大的背景，也会导致样本中其他相关的目标分子的分析复杂化，如转录组测序分析、微阵列的基因表达分析等。微量rRNA去除转录组测序对样本起始量要求更低，通过rRNA去除转录组测序，可以分析各种RNA之间的相互作用及共表达调控网络，并且进行竞争性内源RNA的分析。

技术路线（针对微量mRNA测序）:

 技术优势（针对微量mRNA测序）:

•开放的全转录组分析：无需预先设计探针，直接对任何物种进行全面的转录组分析；

•准确性高：数字化信号，直接测定每个转录本片段的序列；

•检测阈值宽：跨越6个数量级的宽检测阈值，能同时鉴定及定量正常和稀有的转录本；

•分辨率高：可以检测基因家族中相似基因及可变剪接造成的单碱基差异；

•起始量极低：total RNA总量仅需> 400 pg，适用于珍贵样本的测序；

•高效可靠的扩增技术：灵敏度高、无偏好的扩增技术可以富集全长转录本，并且保持原始转录本的相对丰度。

微量mRNA扩增转录组测序

样品类型：完整无基因组DNA污染的Total RNA

样品需求量：Qubit检测，要求浓度≥50 pg/μL；总量≥400 pg

样品完整度：Agilent 2100 Bioanalyzer检测RIN值≥7.0，且28S/18S≥1.0

微量rRNA去除转录组测序

样品类型：完整无基因组DNA污染的Total RNA

样品需求量：总量≥20 ng，浓度≥2 ng/μL

样品完整度：Agilent 2100 Bioanalyzer检测RIN值≥7.0

数据分析内容（针对微量mRNA测序）:

结果展示:

图 实验组样品和对照组样品PCA图

图 差异基因表达散点图

1.微量mRNA测序能够解决哪些实际问题？

答：对于珍贵样本、样本的量较少或者RNA较少来说，微量建库方法无疑是一大利器，在单细胞领域建立起的SMART-seq方法能够满足单个细胞的RNA建库要求，因此能够用于微量样本的转录组测序研究中。

2.除了微量mRNA测序，能够实现微量lncRNA测序吗？

答：我们提供的微量rRNA去除转录组测序能够在一定程度上满足微量lncRNA的研究，而SMART-seq方法实际上能够捕获一部分少量lncRNA。