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ELISA(酶联免疫吸附实验)是一种重要的生物化学分析技术,用于检测和定量特定生物分子,如蛋白质、抗体和抗原。它基于免疫学原理,通过将待测分子吸附到微孔板上的抗体,然后使用标记抗体可视化和定量目标分子。ELISA广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发,因其高敏感性和特异性而备受欢迎。
该技术包括样本固定、阻断、探针添加、洗涤、检测和分析等步骤,用于生成定量结果。ELISA的多种变种和应用使其在疾病诊断、药物疗效评估和前沿研究中都扮演着重要角色。这个技术有助于科学家们深入了解生物分子相互作用,从而推动了生物医学科学的进步。
实验流程图:
样本类型:血清、血浆、细胞上清液和组织匀浆等
样本需求量:样本体积 ≥ 100 mL*检测指标数*1.1
样本保存与运输:体液类样本收集后应尽早检测,2-8℃保存一天;如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存。将冻存的标本,放置在装有5-10公斤干冰的泡沫盒中密封保存运输(干冰保证-40℃的温度,防止样本的反复冻融,5-10公斤的干冰可以保证5-7天的温度)
结果包括:
• 项目样本数统计
• 原始检测结果及数据分析
• 标准曲线绘制
• 待测样本目的蛋白浓度计算
1、如果在ELISA实验中发现背景信号较高,可能采取哪些措施来降低非特异性信号?
答:可以通过优化洗板步骤、使用足够浓度的阻断剂(如牛血清蛋白或非脂牛奶),以及考虑更换洗涤缓冲液的方式来降低非特异性信号。
2、当ELISA实验中出现信号较弱或无法检测到的情况,应该采取哪些步骤来解决这个问题?
答:可以检查底物反应时间是否充足,确认底物浓度是否合适,以及确保样本制备的质量良好,有必要时优化抗体的浓度。
3、在ELISA实验中,如何减少抗体或底物的非特异性结合?
答: 可以通过优化阻断剂浓度、使用预吸附抗体或底物等措施来减少抗体或底物的非特异性结合。
4、当ELISA实验结果受到溶剂残留的影响时,应该采取哪些步骤来解决这个问题?
答:可以确保洗涤步骤充分,以去除可能的溶剂残留,同时确保样本和试剂在制备过程中没有受到污染。
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