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人类微生物组计划(HMP)告诉您“口腔样本如何收集”!
        上期小编和大家讲了人类微生物组计划(HMP)是如何进行粪便样本收集的(点击这里),今天小编把人类微生物组计划(HMP)的口腔样本收集方法给大家整理一下,希望对进行口腔微生物研究的您们有所帮助!
 
 
 
一  需要材料
 
        1.标准的牙科椅和良好的照明。
        2.检测试剂盒:包括至少一把长柄口镜、牙科探针、手术剪、棉花镊、2 x 2纱布垫、棉卷、棉纱布、木制压舌板。
        3.带螺杆盖(外螺纹)2毫升管子(Mobio):内含750μL标本采集液体(Mobio缓冲液)。
        4.50毫升的无菌锥形聚丙烯管(Falcon):用于唾液收集。
        5.预印好的用于收集所有口腔部位的诊所标签。
        6.无菌拭子(Catch-All™,Epicentre Biotechnologies,Madison WI):用于从软组织面收集样本。
        7.多个无菌迷你Gracey刮匙: 一个刮匙将用于取样,把从指数牙收集的龈上牙菌斑混池;另一个刮匙从同一个指数牙取样,把收集的龈下牙菌斑混池;额外的无菌刮匙作为备用所需。
        8.塑料拉链袋:用于封存收集了标本的Mobio管子。
        9.带有冰块的箱子:用于运送样本到临床实验室进行下一步处理。
 
二  收集方法
 
  • 唾液
  • 软组织部位
  • 硬组织部位
 
 
Figure from Cochrane Systematic Reviews on Oral Cancer, May 6, 2007
 
注:每个标本收集后,将管子放在塑料拉链袋里,在上面放冰块,在收集标本后4小时内,送到临床实验室做下一步处理(建议:如果4小时内无法寄送到实验室,建议用干冰运输)。另外注意使用无菌技术收集所有样本。
 
1.唾液
        A.受试者被要求让唾液在口腔中至少收集1分钟,然后将口水吐到带有标记的50毫升无菌收集管中(Falcon,带平顶螺盖的无菌锥形管)。为了收集更多的唾液(2-5毫升),这个过程可能需要重复多次。
        B.另外,唾液可以用咀嚼标准块大小的无味口香糖(1.0–1.5g;箭牌)进行刺激。这块口香糖放在受试者的嘴里,受试者被要求先咽下任何累积的唾液,然后按常规规律咀嚼口香糖,一旦在口腔内积累了足够的唾液,将唾液吐到带标记的收集管中。为了收集更多的唾液(2-5毫升),这个过程可能需要重复多次。
       C.将标本收集管放在塑料拉链袋里,放在冰上,在收集标本后4小时内,送到临床实验室做下一步处理。
 
2.软组织部位

        A.所有软组织部位使用Catch-All™无菌拭子进行采样。采样后,每个拭子必须在含有750 μL MoBio 缓冲液的Mobio管子中打旋,拭子海绵应多次压在管壁上,20秒,以确保细菌从拭子转移到缓冲液中。然后将Mobio缓冲液低温(-80度)冷藏,直到下一步处理。
        1)舌背:用拭子刮拭舌头中部1平方厘米的位置,持续5秒。
        2)硬腭:将整个硬腭刮拭10秒。
        3)颊黏膜:刮拭左、右颊粘膜的整个区域,每个区域10秒,当心别碰牙齿。
        4)角质牙龈:刮拭上颌骨前部附着的牙龈10秒。
        5)腭扁桃体:刮拭左、右腭扁桃体各5秒,专注于裂坑。
        6)咽喉:由于咽反射,因此喉部取样很困难,建议在所有其它软组织和硬组织部位取样后,作为最后一个标本取样。让受试者张开嘴,放松舌头,将压板一直插入舌后部,压低舌头。在咽部后方轻轻地刮拭5秒,注意不要刮拭到扁桃体。
 
3.硬组织部位
1)龈上牙菌斑:

        目标是从6个指数牙上采集龈上牙菌斑样本:2个磨牙(# 3和# 19)、2个前磨牙(# 12和# 28)、2个门齿(# 9和 # 25)。
        磨牙:2个磨牙必须被取样:# 3:右上象限的第一个磨牙;# 19:左下象限的第一个磨牙。如果指数第一个磨牙有一个未恢复的近中面,采集这个牙齿样本。如果指数第一磨牙有一个恢复的近中面,而同一个象限的第二个磨牙有一个未恢复的近中面,则采集第2个磨牙样本。如果指数磨牙象限内的所有磨牙都有恢复的近中面,则对指数第一磨牙进行取样。
        前磨牙:2个前磨牙必须被取样:# 12:左上象限的第一个前磨牙;# 28—右下象限的第一个前磨牙。如果指数第一个前磨牙有一个未恢复的近中面,采集这个牙齿样本。如果指数第一前磨牙有一个恢复的近中面,而同一个象限的第二个前磨牙有一个未恢复的近中面,则采集第2个前磨牙样本。如果指数磨牙象限内的所有前磨牙都有恢复的近中面,则对指数第一磨牙进行取样。如果一个前磨牙因为正畸拔牙造成缺失,无论是否近中表面已经修复,都要对残余前磨牙取样。
        门齿:2个门牙必须被取样:# 9:左上象限中门齿;# 25:右下象限中门齿。
        采样步骤:对于牙齿,首先用棉卷将取样部位分离出来,并用来自气-水冲洗器的温和气流进行干燥,接着使用Gracey刮匙尽可能多地刮取被选定指数牙近中面的所有龈上牙菌斑,将刮匙头部浸没在Mobio缓冲液中4-5秒,用收集管内壁擦干净刮匙表面的标本,可以用上述方法重复采集样本,最后将标本收集管放在塑料拉链袋里,放在冰上,在收集标本后4小时内,送到临床实验室做下一步处理。(如果受试者菌斑很少,应对对指数磨牙和前磨牙的配对指数牙进行采样,例如,# 14:左上象限第一磨牙;# 30:右下象限第一磨牙;# 5:右上象限第一前磨牙;# 21:左下象限第一前磨牙,更换Mobio盖子,摇4-5秒,使样本在液体中最大限度地分散)
 
2)龈下牙菌斑:
采样步骤:

        对龈下牙菌斑采集前,同样用棉卷将取样部位分离出来,然后干燥取样部位,并去除任何残留的龈上牙菌斑,接着使用Gracey刮匙尽可能多地刮取被选定指数牙近中面的所有龈下牙菌斑,将刮匙头部浸没在Mobio缓冲液中4-5秒,用收集管内壁擦干净刮匙表面的标本。根据临床判断丢弃有明显出血的标本,如果有出血,不建议对同一部位立即重新采集样本。如果汇集的牙菌斑不够,则按上面描述对配对指数牙齿进行取样。经过上述采样,如果斑块仍然不够,则对第二磨牙近中颊侧龈下牙菌斑进行采样,然后将这些标本与第一次采集的标本合并。后续样本处理及样本保存方式与龈上牙菌斑相同。
 
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