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技术服务

DNA修饰酶/扩增酶/连接酶



Exonuclease I

制剂说明:

      E.coli exonuclease I是单链特异性3′→5′核酸外切酶,分解生成5′-单核苷酸。本酶对单链DNA的特异性非常高,不分解双链DNA及RNA。可通过80℃处理15分钟使之失活。

活性定义:

       以热变性的小牛胸腺DNA为底物,在37℃、pH9.5的条件下,30分钟内产生10 nmol 的酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

质量控制:

 •  20 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应8小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  20 units的本酶和25 ng的M13 mp18 ssDNA在37℃的条件下反应8小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  PCR反应后残存引物的分解。
 •  在反应液中去除ssDNA 片段。

产品规格:

货号 规格
 P1001S   200 μl/4,000U
 P1001L   500 μl/10,000U


Exonuclease Ⅲ

制剂说明:

      本酶具有作用于双链DNA的3′→5′外切酶活性。本酶对双链结构具有高度特异性,能降解平滑末端、3′凹陷末端及有切口的DNA,但是不能降解3′-突出末端。所以,可以用产生不同末端的限制酶通过双重降解 (Double digestion) 后,利用Exonuclease III的3′→5′的外切酶活性,从一端降解,得到互补的单链DNA和5’-P单核苷酸。

活性定义:

      以限制酶处理的小牛胸腺DNA为底物,在37℃、pH8.0的条件下,30分钟内产生1 nmol酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

质量控制:

 •  50 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  50 units的本酶和10μM的FAM-ssDNA-50在37℃的条件下反应1小时,DNA的电泳谱带不 发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  通过部分降解双链DNA片段,产生一部分单链DNA片段,作DNA聚合酶的底物。生成的DNA可用于双脱氧法序列分析。
 •  与单链特异性核酸酶 (S1 Nuclease或Mung Bean Nuclease) 合用制作DNA缺失片段。本酶对双链结构DNA具有高度特 异性,对于双酶切DNA片段 (例如EcoR I-Pst I Fragment) 能制作单向 (EcoR I 方向) 缺失的DNA。
 •  DNA-蛋白质相互作用分

产品规格:

货号 规格
 P1002S   200 μl/4,0000U
 P1002L   500 μl/10,0000U


T4 DNA ligase

制剂说明:

      本酶催化相邻DNA链的5′-P末端和3′-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需Mg2+和ATP作辅因子,最适反应pH为7.6。本酶可以催化粘性末端之间和平滑末端之间的DNA的连接。

活性定义:

      在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

      本酶的1 unit相当于在含有6.6 mM MgCl2,10 mM DTT,66 μM ATP和3.3 μM [32P]-Na4P2O7的66 mM Tris-HCl (pH7.6) 中发生ATP-PPi交换反应的0.008 Weiss Unit。

质量控制:

 •  350 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在16℃的条件下反应8小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  350 units的本酶和25 ng的M13mp18 ssDNA在16℃的条件下反应8小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  DNA片段和载体DNA的连接。
 •  DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。

产品规格:

货号 规格
 P1004S   200 μl/70,000U
 P1004L   500 μl/175,000U


T4 DNA polymerase

制剂说明:

       在模板及引物存在的条件下,催化与模板互补的脱氧核苷酸依次选择性地连接在引物的3′-OH末端上的反应。本酶还具有单链DNA特异性的3′→5′外切核酸酶活性,该活性比Klenow Fragment强100~1,000倍。本酶没有5′→3′的外切核酸酶活性。

活性定义:

      以合成的Poly (dA-dT) DNA为摸板/引物,在37℃、pH8.8条件下,30分钟内使10 nmol的dATP和dTTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位 (U)。

质量控制:

 •  3 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  利用较强的3′→5′的外切核酸酶活性,通过置换合成从DNA片段的3’末端进行标记。
 •  3′DNA末端的平滑化, 5′突出末端补平。
 •  通过引物延伸法解析mRNA转录的起始点。

产品规格:

货号 规格
 P1005S   200 μl/600U
 P1005L   500 μl/1500U


T4 Polynucleotide Kinase

制剂说明:

本酶具有以下活性:
5′-OH末端寡核苷酸的磷酸化及5′-P末端寡核苷酸的去磷酸化。
      5′-OH + ATP→5′-P + ADP
磷酸交换反应:
      5′-P + ATP + ADP←→5′-P + ADP + ATP

活性定义:

      以Micrococcal Nuclease处理的小牛胸腺DNA为底物,在37℃,pH7.6的条件下,30分钟内使1 nmol的[γ-32P]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

质量控制:

 •  10 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应12小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  10 units的本酶和25 ng的M13mp18 ssDNA在37℃的条件下反应12小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  DNA及RNA 5′末端的标记。
 •  合成DNA接头 (Linker) 的5′末端磷酸化。

产品规格:

货号 规格
 P1006S   200 μl/2,000U
 P1006L   500 μl/5,000U


Taq DNA ligase

制剂说明:

      Taq DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5′-磷酸末端和 3′-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对,并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内,Taq DNA 连接酶均有活性。

活性定义:

       1个活性单位 (unit)指 50 μl 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。

质量控制:

 • 50units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在16℃的条件下反应4小时,65℃10min灭活后,DNA的电泳谱带不发生变化。
 • 50 units的本酶和25 ng的M13mp18 ssDNA在16℃的条件下反应4小时,65℃10min灭活后,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  用于连接酶检测反应或连接酶链反应进行等位基因特异性检测
 •  通过在PCR扩增过程中掺入磷酸化寡核苷酸来进行诱变。

产品规格:

货号 规格
 P1008S   200 μl/10,000U
 P1008L   500 μl/25,000U


Lambda Exonuclease

制剂说明:

      本酶作用于双链DNA,沿5′→3′方向渐近性催化去除5′单核苷酸。最适底物是5′磷酸化的双链DNA,也能降解单链DNA和非磷酸化底物,但效率很低。不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。

活性定义:

      1个活性单位 (unit)是指在50ul反应体系中,37℃反应30分钟,能从双链DNA底物上催化产生10 nmol酸可溶性脱氧核糖核苷酸所要求的酶量。

质量控制:

 • 5 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应3小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 • 5 units的本酶和25 ng的M13mp18 ssDNA在37℃的条件下反应3小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  DNA测序中制备单链的PCR产物。
 •  单链DNA构象分析以及从双链中制备单链DNA。

产品规格:

货号 规格
 P1003S   200 μl/10,00U
 P1003L   500 μl/25,00U


Klenow fragment

制剂说明:

      本酶在DNA模板和引物存在的条件下,选择性地催化底物dNTP沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本酶是从大肠杆菌中纯化得到,其中克隆了2/3的E.coli DNA polymerase I基因片段 (3′端计算) 。因此具有3′→5′外切酶活性但是没有5′→3′外切酶活性。

活性定义:

       以合成的Poly d(A-T) DNA为模板/引物,在37℃、pH7.4的条件下,30分钟内使10 nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

质量控制:

 • 2 units的本酶和50 ng的超螺旋ΦX174 RF I DNA 在37℃的条件下反应6小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 • 2 units的本酶和25 ng的M13mp18 ssDNA在37℃的条件下反应6小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
 •  通过SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝显色,酶的纯度可达到98%以上。

用途:

 •  双脱氧法DNA序列测定 (Sanger法)。
 •  双链DNA 5′突出末端的平滑化。
 •  寡核苷酸定向诱变 (Oligonucleotide directed mutagenesis) 中双链DNA的合成。
 •  使用随机引物进行DNA标记。

产品规格:

货号 规格
 P1010S   200 μl/10,00U
 P1010L   500 μl/25,00U


Stoffel fragment (Hemo KlenTaq)

制剂说明:

      Stoffel fragment是截短后的 Taq DNA 聚合酶,它缺失了 N 端的 280 个氨基酸。Stoffel fragment还有其它突变,这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂。此酶能够扩增人和小鼠全血样品中的 DNA 而无需事先提纯。Stoffel fragment在 25 μl 的反应体系中能够耐受高达 20% 的全血(50μl反应体系中耐受 30%)。在大多数抗凝剂存在下 Stoffel fragment依然表现良好,包括肝素、柠檬酸和 EDTA。

活性定义:

      在单链延伸反应中,72℃ 30min内使引物引物延伸摄入10nM dNTP的Stoffel fragment酶量定义为一个活力单位(Unit)

质量控制:

 • 0.5kb全血PCR:以10%全血为模板(分别用肝素钠、Na-EDTA或柠檬酸钠处理),50μl体系中加入4μl Stoffel fragment、200μM dNTPs、0.3μM引物和1×Stoffel fragment反应缓冲液PCR扩增35个循环,获得特异性0.5kb PCR产物。
 • 3′→5′核酸外切酶活性检测:20μl反应体系中,荧光标记的10nM 5′-FAM寡核苷酸溶液中,加入400单位Stoffel fragment,分别于37℃和75℃温育30分钟,没有检测到3′→5′的降解。
 • 切酶活性检测:50μl体系中,400单位Stoffel fragment与1μg的超螺旋ΦX174 RF I DNA分别于37℃和75℃温育4小时,DNA的核酸电泳谱带检测到小于10%RFⅠ型转变成RFⅡ型。

用途:

 • 全血PCR
 • 引物延伸

产品规格:

货号 规格
 P1009S   200 μl/10,00U
 P1009L   500 μl/2,500U
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