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技术服务

DNA甲基化克隆测序

DNA甲基化克隆测序

技术简介:

      异常甲基化是癌症中的普遍现象,还可能是肿瘤形成过程中最早出现的变化之一。另外,研究已经表明 DNA 甲基化在基因印记、胚胎发育、x 染色体基因沉默和细胞周期调控中发挥关键作用。

技术方法:

      Bisulfite修饰后直接测序是由Frommer等 (1992)提出的DNA甲基化研究方法。该方法是首先使用Bisulfite修饰基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计引物进行PCR扩增,PCR产物克隆测序,定量分析每个CpG岛甲基化情况。 该方法优点:可靠性及精确度高,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。是目前新甲基化位点的寻找和基因特异位点甲基化的检测最可靠方法之一。

应用领域:

      此方法广泛应用于肿瘤基因组学和疾病基因组学的研究。

服务特色

检测对象:

      DNA样本

实验流程

     • DNA样本的质检与标化;
     • 引物的设计、合成与优化;
     • DNA的Bisulfite处理;
     • 目的CpG岛扩增,克隆及测序;
     • 测序结果分析与整理。

测序结果分析:实验专业甲基化分析软件对测序序列进行甲基化分析,可以得到如下数据:

A. 测序序列与目的序列的相似度(%);
B. C-T转化效率(%);
C. 目的片段中每个CG的甲基化情况(点状图);
D. 每个CG的甲基化率(%);

A.点状图


B.同一样本不同克隆测序图


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